レンチウイルスのパッケージングでは、ウイルス放出のために細胞を破砕する必要がありますか?

Dec 16 , 2025
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必要ありません。
通常のレンチウイルス(Lentivirus)パッケージングおよび回収工程では、細胞破砕は不要であり、推奨もされていません。

1.なぜ細胞破砕が不要なのか?

レンチウイルスは出芽型ウイルス(budding virus)であり、
293T などのパッケージング細胞から 細胞膜を介して継続的に出芽し、培養上清中に放出されます。
そのため、ウイルスの主な存在場所は 細胞内ではなく培養上清です。

👉 細胞を破砕すると、以下の問題が生じる可能性があります:

  • 宿主由来タンパク質、DNA、細胞破片の大量混入

  • ウイルス毒性の増加、感染効率の低下

  • ウイルス純度の低下、力価測定への影響

  • 機能性ウイルス量の有意な増加は見られない

2.推奨される標準的なレンチウイルス回収フロー

  1. 293T パッケージング細胞へ(3 プラスミドまたは 4 プラスミド系)で共トランスフェクション

  2. トランスフェクション後 48 時間および 72 時間で培養上清を回収

  3. 3000 g、10 分間の遠心で細胞破片を除去

  4. 0.45 μm フィルターでろ過

  5. そのまま使用、または PEG 沈殿法/超遠心により濃縮

📌 全工程において 細胞破砕は行わない

3.「細胞破砕」が登場するのはどんな場合?

以下のケースで混同されることがあります:

1️⃣ AAV(アデノ随伴ウイルス)

AAV は多くの場合 細胞内に滞留するため、

ウイルス回収には 細胞破砕が必須です。

AAV:細胞破砕が必要 / レンチウイルス:不要

2️⃣ ウイルス関連の解析実験

例:

  • Gag、p24 タンパク質の Western blot

  • パッケージング成功の確認
    ※ ウイルス回収目的ではありません

3️⃣ 非標準または誤った操作

細胞を破砕すればレンチウイルス力価が上がるというのは、
よくある誤解です。

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