高品質AAV作製のための品質管理（QC）項目とは

高品質なAAV（アデノ随伴ウイルス）を安定して作製するためには、製造工程ごとに適切な品質管理（QC）項目を設定し、体系的に評価することが非常に重要です。以下では、研究用AAVから前臨床レベルまで幅広く用いられている代表的なQC項目を整理して解説します。

1️⃣ 力価・量に関するQC（Potency / Quantity）

● ゲノム力価（Vector Genome, vg）

• 測定方法：qPCR / ddPCR

• 評価目的：封入されたAAVゲノム量の定量

• 重要性：投与量設計・実験再現性の基盤指標

● 感染価・機能力価

測定方法：

• 細胞感染＋蛍光観察
• Luciferase活性測定
• Flow cytometry

評価目的：実際に「機能するAAV」の割合を評価

ポイント：vg値が高くても、機能力価が低いケースは多い

2️⃣ 純度・構造に関するQC（Purity / Integrity）

● カプシドタンパク解析

• 方法：SDS-PAGE + Silver染色 / Western blot

• 評価対象：VP1 / VP2 / VP3 比率

• 理想比率：おおよそ 1 : 1 : 10

● フル粒子率（Full / Empty Capsid）

測定方法：

• Analytical ultracentrifugation（AUC）
• TEM
• HPLC（SEC / AEX）

重要性：Empty capsidが多いと発現効率・安全性低下

3️⃣ 安全性に関するQC（Safety）

● 宿主細胞由来不純物

• 残留DNA：qPCR

• 残留タンパク質（HCP）：ELISA

• 基準：研究用途でも低レベルが望ましい

● エンドトキシン

測定方法：LAL試験

一般基準：

• 研究用：＜5 EU/mL
• in vivo用途：可能な限り低値

● 無菌試験 / マイコプラズマ

• 用途：細胞感染・動物実験前に必須

4️⃣ 遺伝子配列・封入品質のQC

● ITR完全性

• 方法：制限酵素消化、NGS、Southern blot

• 重要性：ITR欠損は力価低下・発現不良の原因

● トランスジーン配列確認

方法：Sanger / NGS

確認内容：

• 欠失・変異
• リアレンジの有無

5️⃣ 機能評価（Functional QC）

● in vitro 発現確認

• 対象：目的遺伝子発現量・局在

• 方法：IF / WB / RT-qPCR

● in vivo 発現試験（必要に応じて）

評価項目：

• 組織特異性
• 発現持続性
• 投与量依存性

6️⃣ 物理・保存安定性QC

● 保存安定性

評価条件：

• −80℃
• 凍結融解耐性

指標：vg・感染価の変動

まとめ｜研究用AAVで最低限押さえるべきQC項目