AAVの一般的な滴度測定方法まとめ

1. qPCR（定量PCR）による滴度測定

原理：

• ウイルスゲノムコピー数（vg, viral genome）を検出。AAVゲノムの特定配列（通常はITRや転写遺伝子）を増幅して定量する。

長所：

• 高感度で低滴度でも測定可能
• 定量精度が高く、再現性が良い
• 感染性に依存せず、あらゆる血清型で使用可能

短所：

• 感染性のない「空カプシド」を区別できない
• 高純度DNAの抽出が必要

適用例：

• 生産工程のモニタリング
• バッチ間のゲノム含量比較

2. ELISA（酵素免疫測定法）による滴度測定

原理：

• 特異的抗体でAAVカプシドタンパク（VP1/VP2/VP3）を認識し、ウイルス粒子数（pp）を定量する。

長所：

• 操作が簡単で迅速
• ウイルス粒子の総数を直接測定可能
• 細胞感染を必要としない

短所：

• 空カプシドと感染性ウイルスを区別できない
• 血清型ごとの特異抗体が必要

適用例：

• ウイルス総量の概算
• qPCRとの併用でパッケージ効率（vg/pp比）の評価

3. 感染性滴度（Functional Titer / Transduction Assay）

原理：

• 細胞や動物モデルに感染させ、ウイルス感染能を評価（例：蛍光レポーター遺伝子の発現）。

長所：

• 実際の感染能力を反映
• バッチ間の機能差を評価可能

短所：

• 時間がかかる（2〜3日）
• 細胞種や感染条件に依存

適用例：

• 機能性確認
• 生産プロセスの最適化

4. 電子顕微鏡（EM）によるカウント

原理：

• ウイルス粒子を直接観察し、顆粒数をカウント。

長所：

• 粒子の直接可視化
• 完全粒子と空カプシドの区別が可能

短所：

• 高価で操作が難しい
• 多数サンプルの測定には不向き

適用例：

• ウイルス粒子構造の解析
• 高度な研究や工業プロセス検証

5. その他の方法

まとめ

推奨：qPCR + ELISAで総粒子数とゲノム数を評価し、感染性滴度で機能性を確認する組み合わせが一般的。