AAVは蛍光タグを搭載できますか？

はい、可能です。アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターは、蛍光タンパク質のコード配列を搭載することで、遺伝子導入効率、発現細胞および組織分布を可視化することができます。
本手法は、in vitro 細胞実験および in vivo 動物実験の双方において広く用いられており、AAV ベクターデザインにおける一般的な戦略です。

AAV における蛍光タグ搭載の代表的な設計方法

1. レポーター遺伝子として蛍光タンパク質を単独発現

ベクター構造例：プロモーター – GFP / mCherry

特徴・用途：

• シンプルな構造で安定した発現

• AAV の感染効率、組織分布、発現範囲の評価に適する

• ポジティブコントロールやトレーサーベクターとして使用可能

2. 目的遺伝子と蛍光タンパク質の融合発現

ベクター構造例：Gene–GFP または GFP–Gene

特徴・用途：

• タンパク質局在や発現動態の解析に有用

• 目的タンパク質の特性に応じて N 末端または C 末端融合を選択

• 融合によりタンパク質機能が影響を受ける可能性があるため、慎重な検討が必要

3. 目的遺伝子と蛍光タンパク質の共発現（推奨）

主な方式：

• IRES を用いた共発現

• 2A ペプチド（P2A、T2A など）を用いた共発現

ベクター構造例：Gene–P2A–GFP

利点：

• 目的タンパク質と蛍光タンパク質が独立して発現し、機能への影響が少ない

• 同一細胞内で蛍光シグナルによる導入確認が可能

• AAV 過剰発現研究において最も一般的に用いられる設計方式

蛍光タグ設計時の重要な注意点

1. AAV のパッケージング容量制限

AAV の最大搭載容量は約 4.7 kb（ITR 含む）

主な蛍光タンパク質サイズ：

• EGFP：約 0.72 kb
• mCherry：約 0.7 kb
• tdTomato：約 1.4 kb

目的遺伝子が大きい場合や組織特異的プロモーターを使用する場合は、全長を事前に評価し、過剰搭載によるパッケージング効率低下を回避する必要があります。

2. プロモーターの選択

• 強力プロモーター（CMV、CAG）：高発現、汎用性が高い

• 組織特異的プロモーター：高い特異性を有するが、配列長が長い場合が多い

• 発現レベルと容量制限のバランスを考慮することが重要

3. 適用シーンの違い

in vitro 細胞実験：GFP、mCherry など一般的な蛍光タンパク質が使用可能

in vivo 動物実験：

• 赤色蛍光タンパク質は組織透過性に優れる
• 緑色蛍光は組織自家蛍光の影響を受けやすい場合がある

まとめ

• AAV ベクターは蛍光タグを安定して搭載・発現可能

• 2A / IRES 共発現は機能研究において最も汎用的

• ベクター容量は設計段階で最も重要な制限要因

• 適切な蛍光タンパク質およびプロモーターの選択が、実験成功率の向上につながる