AAV（アデノ随伴ウイルス）ベクター作製サービスの全体フロー

1．事前コンサルティング・技術評価

目的：プロジェクトの実現可能性を確認し、リスクを最小化

• 研究目的の確認（過剰発現／ノックダウン／CRISPR）

• 使用条件（in vivo / in vitro）

• 対象動物種・標的組織の確認

• 血清型（AAV1–AAV9、PHP.eB、DJ 等）の選定

• 発現カセットサイズ（≤4.7 kb）の評価

成果物：技術提案書、見積、スケジュール

2．AAV 発現ベクター設計・プラスミド作製

目的：高品質かつパッケージング可能なプラスミドの作製

• ITR 構造を考慮したベクター設計

• プロモーター・遺伝子・PolyA の最適化

• クローニングおよびシーケンス検証

• エンドトキシンフリー・プラスミド調製

※ お客様ご提供プラスミドの場合は、事前品質チェックを実施

3．AAV ウイルス産生（パッケージング）

目的：安定かつ高効率な AAV ベクター産生

• HEK293 / HEK293T 細胞培養

• 三種プラスミド共トランスフェクション

• 発現後 48–72 時間でウイルス回収

4．AAV ウイルス精製

目的：高純度 AAV ベクターの取得

• ヨードキサノール密度勾配遠心

• クロマトグラフィー精製（AVB 等）

• 不純物および空カプシドの除去

5．濃縮・バッファー置換

• 超濾過による濃縮

• 注射用バッファー（PBS 等）への交換

• 最終容量の調整

6．品質管理（QC）

目的：安全性・再現性・信頼性の確保

• ウイルス力価測定（qPCR / ddPCR）

• 純度・カプシド解析（VP1/2/3）

• 無菌試験、エンドトキシン試験

• 機能評価（オプション）

7．分注・保管・納品

• 無菌分注（低吸着チューブ）

• −80℃ 保管

• ドライアイス輸送

• QC レポート（COA）添付

8．アフターサポート

• 感染条件・投与量の最適化提案

• 発現不良時のトラブルシューティング

• 継続プロジェクトの技術支援