AAV 三プラスミド包装の最適化 お客様向け FAQ

Q1：AAV 三プラスミド包装システムとは何ですか？

AAV 三プラスミド包装システムは、現在最も一般的に使用されている AAV 製造方法です。
通常、HEK293 系細胞に以下の 3 種類のプラスミドを一過性導入することで AAV を産生します。

1.トランスファープラスミド

• ITR 配列および目的遺伝子発現カセットを含む

2. Rep/Cap プラスミド

• AAV の複製およびカプシド形成に必要

3. Helper プラスミド

• アデノウイルス由来の補助遺伝子（E2A、E4、VA RNA）を供給

Q2：三プラスミドの比率は AAV 収量に影響しますか？

はい。大きく影響します。

一般的な初期条件は 1:1:1（重量比） ですが、血清型やベクターデザインによって最適比率は異なります。
よく使用される最適化比率には以下があります。

• 1 : 1 : 2

• 1 : 2 : 1

• 1 : 1.5 : 1.5

不適切な比率は、収量低下や空カプシド率の増加を引き起こす可能性があります。

Q3：トランスファープラスミドのサイズは包装効率に影響しますか？

はい。AAV はゲノムサイズに非常に敏感です。

ITR を含む全長は 4.7 kb 以下を推奨

サイズ超過の場合：

• 包装効率の低下
• 不完全ゲノムの増加
• 発現の不安定化

Q4：強力なプロモーターほど AAV 収量は高くなりますか？

必ずしもそうではありません。

強力なプロモーター（例：CMV）は、
細胞毒性を引き起こし、結果的に AAV 収量が低下する場合があります。

中程度または組織特異的プロモーターの使用により、
より高い実用的ウイルス収量が得られることがあります。

Q5：GFP 蛍光が強い＝AAV 滴度が高い、ですか？

いいえ。

• GFP 蛍光は転写・発現の指標に過ぎません

• AAV 粒子数や機能的滴度を直接反映しません

AAV 滴度は qPCR、ddPCR、ELISA などで評価する必要があります。

Q6：トランスフェクション条件は重要ですか？

非常に重要です。

主な影響因子：

• 細胞の状態（70–80% コンフルエンシー、マイコプラズマ陰性）

• トランスフェクション試薬（PEI 等）

• DNA：試薬比率

• トランスフェクション後の培養条件

Q7：AAV の最適な回収時間は？

一般的には トランスフェクション後 48–72 時間 です。
血清型や条件により、72 時間で収量が向上する場合もあります。

Q8：高滴度なのに転導効率が低いのはなぜですか？

考えられる原因：

• 空カプシド率が高い

• ゲノム不完全

• 実際の機能的滴度が低い

• 血清型が標的細胞に適していない

Q9：三プラスミド包装の最適化で空カプシドを減らせますか？

可能です。

• プラスミド比率の最適化

• トランスフェクション条件の改善

• ゲノムサイズの適正化

は空カプシド低減に有効です。

Q10：自社での AAV 包装が安定しない場合はどうすればよいですか？

AAV 三プラスミド包装は、
プラスミド設計、比率、トランスフェクション条件、培養・回収工程など
多数の要因が結果に影響する高度なプロセスです。

再現性の確保や安定した品質が難しい場合は、
AAV 包装に特化した専門サービスの利用をおすすめします。

当社では：

• 血清型別に最適化された三プラスミド包装条件

• 高い再現性を実現する標準化プロセス

• 厳格な品質管理および滴度評価

• 研究用途から前臨床用途まで対応可能な AAV 製造体制

を提供し、安定した高品質 AAV の供給をサポートしています。