PCR 法による AAV ウイルスタイター測定（FAQ）

PCR 法で AAV ウイルスタイターはどのように測定しますか？

回答：

PCR 法（主に qPCR または ddPCR）は、AAV ウイルスに封入された ウイルスゲノム DNA のコピー数を定量することで、AAV ゲノムタイター（vg/mL）を算出する方法です。
現在、研究用途および AAV 受託製造サービスにおいて 最も一般的かつ標準的に使用されています。

PCR 法で測定されるのはどの種類のタイターですか？

回答：

PCR 法で測定されるのは AAV ゲノムタイター（viral genome, vg/mL）です。
これはウイルス衣殻内に正しく封入されたゲノム DNA の量を反映しており、感染価や機能的タイターとは異なります。

PCR 法による測定原理を教えてください。

回答：

PCR 法による AAV タイター測定は、以下の工程で行われます。

1. DNase I 処理：封入されていない遊離 DNA を分解

2. ウイルス衣殻の破壊：AAV ゲノムを放出

3. qPCR / ddPCR による定量解析

4. ゲノムタイター（vg/mL）の算出

qPCR と ddPCR の違いは何ですか？

回答：

通常の研究用途では qPCR が広く使用されています。

PCR 法で使用される主な検出ターゲットは何ですか？

回答：

• ITR（逆末端反復配列）（最も一般的）

• WPRE

• polyA

• プロモーター配列（CMV、CAG など）

中でも ITR 配列は、血清型に依存せず使用できるため、最も汎用的です。

PCR 法で測定される AAV タイターの一般的な範囲は？

回答：

• 1×10¹¹ ～ 1×10¹² vg/mL（標準的な研究グレード）

• 1×10¹² ～ 1×10¹³ vg/mL（最適化後）

• 高品質精製品ではさらに高値となる場合があります。

PCR 法の結果は感染効率を示しますか？

回答：いいえ。PCR 法は ゲノムコピー数を示す指標であり、感染効率は血清型、細胞種、MOI、実験条件などに大きく依存します。

PCR 法で測定したタイターが高く出る原因は？

回答：

• DNase I 処理が不十分

• プラスミド DNA の混入

• 標準品や計算方法の違い

正確な前処理と標準化された測定条件が重要です。

まとめ

PCR 法（qPCR / ddPCR）は、AAV ウイルスゲノム DNA のコピー数を定量することでゲノムタイター（vg/mL）を算出する、信頼性の高い標準的な測定方法です。