AAV／レンチウイルスベクターにおける 蛍光タンパク質の選択と使用

Q1：なぜウイルスベクターに蛍光タンパク質を組み込むのですか？

A：蛍光タンパク質は、ウイルス感染の成功確認、感染効率の評価、目的遺伝子の発現追跡に使用されます。
Western blot や qPCR と比べ、蛍光観察は迅速かつ直感的であり、特に感染陽性コントロールとして広く利用されています。

Q2：AAV とレンチウイルスで蛍光タンパク質の選択に違いはありますか？

A：はい、明確な違いがあります。

レンチウイルス（LV）：搭載容量が大きく、EGFP、mCherry、tdTomato など多くの蛍光タンパク質が使用可能です。

AAV：搭載容量が限られており（約 4.7 kb）、蛍光タンパク質のサイズが包装効率やウイルス力価に大きく影響します。

Q3：最も一般的で推奨される蛍光タンパク質は何ですか？

A：EGFP です。

• 安定した発現

• 幅広い細胞種に対応

• AAV／レンチウイルス両方と高い互換性

• コストとリスクが低い

EGFP は最も汎用性が高く、安全な選択肢です。

Q4：赤色蛍光タンパク質はどのような場合に適していますか？

A：以下のような場合に推奨されます（例：mCherry）。

• 組織や動物実験で自家蛍光が強い場合

• GFP との多色解析が必要な場合

• in vivo での長期発現観察

AAV では、サイズの大きい tdTomato の使用は一般的に推奨されません。

Q5：蛍光タンパク質を目的遺伝子と融合させるべきですか？

A：通常は推奨されません。

融合発現（GOI–GFP）：

• タンパク質の構造や機能、局在に影響を与える可能性があります。

推奨構成：2A ペプチドによる共発現

• 目的遺伝子と蛍光タンパク質を同時に発現でき、機能への影響を最小限に抑えられます

Q6：ウイルスを感染させたのに蛍光が見えない原因は？

A：主な原因として以下が考えられます。

• 使用したプロモーターが細胞に適していない

• ウイルス投与量（MOI / vg）が不足している

• 蛍光タンパク質の成熟時間が不十分

• 顕微鏡のフィルター設定が不適切

• 目的遺伝子の細胞毒性による発現抑制

Q7：AAV において蛍光タンパク質はウイルス力価に影響しますか？

A：はい、影響します。

挿入配列が大きいほど、

• ウイルス力価の低下

• 空カプシド比率の上昇

• 発現の不安定化

が起こる可能性があります。

Q8：蛍光タンパク質のみを発現するウイルスは作製できますか？

A：可能であり、強く推奨されます。

以下の用途で広く使用されます：

• 感染条件の最適化

• MOI テスト

• 細胞・動物モデルの予備実験

Q9：PackGene は蛍光タンパク質やベクター設計の相談に対応していますか？

A：はい、対応可能です。

PackGene では、

• ウイルスタイプ（AAV／LV）

• 遺伝子サイズ

• 実験モデル（in vitro / in vivo）

に基づき、最適なベクター設計をご提案します。

まとめ

蛍光タンパク質は装飾ではなく、
ウイルスベクター成功率を左右する重要な要素です。