慢病毒の滴度が低下する原因は、主にプラスミド設計、包装細胞の状態、トランスフェクション条件、ウイルス回収・濃縮工程、および滴度測定方法のいずれか、または複数に起因します。
主な原因は以下の通りです：
1.プラスミド設計の問題
- 挿入遺伝子が大きすぎる（一般に 8 kb 超）
- 発現遺伝子に細胞毒性がある
- 不適切なプロモーター使用
- 高 GC 含量や反復配列の存在
2.包装用プラスミドの品質・比率
- プラスミドの劣化、内毒素汚染
- Gag/Pol、Rev、VSV-G の比率不適切
3.包装細胞（HEK293T）の状態不良
細胞の過剰継代
トランスフェクション時のコンフルエンシー不適切
マイコプラズマ汚染
4.トランスフェクション効率の低下
- トランスフェクション試薬の選択不適切
- DNA と試薬の比率不最適
- 培地条件（血清の影響など）
5.ウイルス回収・濃縮工程の問題
- 回収時間が早すぎる、または回数不足
- 凍結融解の繰り返し
- 濃縮工程中のウイルス損失
6.滴度測定方法の違い
- qPCR と機能滴度の乖離
- 感染効率の低い細胞株を使用
安定した高滴度を得るためには、各工程の最適化と総合的な評価が重要です。
PackGeneについて
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