Q:AAVウイルスは一般的に遺伝子ノックアウト(Knockout)に使用されますか?それとも過剰発現(Overexpression)ですか?
A:AAVの最も一般的な用途は遺伝子の過剰発現です。ノックダウンにも使用可能ですが、ノックアウトを行う場合は通常CRISPRシステムとの併用が必要です。
① AAVの主な用途:遺伝子過剰発現
AAVは安全性が高く、長期発現が可能な遺伝子導入ベクターです。細胞内では主にエピソームとして存在し、安定した外来遺伝子発現が可能です。
主な用途:
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cDNAの過剰発現
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GFP・mCherryなどの蛍光タンパク質発現
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遺伝子機能解析
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動物モデル作製
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遺伝子治療研究
そのため、研究および前臨床研究ではAAVは主に「過剰発現」に使用されます。
② AAVによる遺伝子ノックダウン
AAVは以下を発現させることで遺伝子発現を抑制できます:
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shRNA
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miRNA
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artificial miRNA
特徴:
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長期間の発現が可能
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in vivo研究に適している
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完全な欠失ではなく発現抑制
③ AAVで遺伝子ノックアウトは可能?
AAV自体にはゲノム編集機能はありません。
遺伝子ノックアウトを行う場合は:
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AAVでCRISPR/Cas9を送達
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Cas9トランスジェニック動物にsgRNAをAAVで送達
注意点:
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AAVのパッケージング容量:約4.7 kb
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SpCas9はサイズが大きく容量制限に注意
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SaCas9や分割Cas9の使用が一般的
AAVによるノックアウトはCRISPRシステムとの併用が必要です。
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