AAVのエンドトキシン試験（Endotoxin Testing for AAV）

組換えAAV（Adeno-Associated Virus）の製造工程において、エンドトキシン（Endotoxin）は重要な品質管理（Quality Control, QC）項目の一つです。エンドトキシンは主にグラム陰性菌の細胞壁成分であるリポ多糖（LPS）に由来し、残留量が基準値を超えた場合、動物実験における炎症反応の誘発や、臨床応用時の安全性リスクにつながる可能性があります。

1. AAVエンドトキシン試験の目的

• 動物実験における安全性の確保

• 実験データの信頼性維持

• IND申請および臨床用途における規制要件への適合

2. 主な測定方法

（1）LAL法（Limulus Amebocyte Lysate試験）

カブトガニ由来の試薬を用い、LPSに特異的に反応する原理に基づく測定法です。

主な測定形式：

• ゲル化法（Gel-clot法）

• 比色法（Chromogenic法）

• 比濁法（Turbidimetric法）

特長：

• 高感度（0.01 EU/mLレベルまで検出可能）

• 各国薬局方（USP <85> など）に収載

• GMP製造に広く採用

※ AAV試料による反応阻害・増強の可能性があるため、干渉試験（Inhibition/Enhancement Test）の実施が必要です。

（2）rFC法（Recombinant Factor C法）

遺伝子組換えFactor Cを用いたエンドトキシン検出法です。

特長：

• 動物由来原料を使用しない

• 高い特異性と再現性

• 近年、GMP製造分野での採用が拡大

3. 一般的な管理基準

※ 最終基準は投与経路（脳内、静脈内、筋肉内等）および投与量に基づき算出されます。

4. 試験実施時の注意点

• 試料の適切な希釈

• 阻害・増強試験の実施

• パイロジェンフリー器材の使用

• 無菌環境の維持

5. 内毒素低減対策

• Endotoxin-freeプラスミドの使用

• クロマトグラフィー精製の採用

• 超濾過およびバッファー置換

• 無熱原管理体制の徹底