AAVによる遺伝子ノックダウン初期段階FAQ

Q1：AAVノックダウン実験において初期検証はなぜ必要ですか？

A：shRNA配列の有効性、ベクター設計の妥当性、および感染系の適合性を事前に確認することで、動物実験の失敗リスクを大幅に低減できます。

Q2：細胞実験を行わずに直接動物実験を実施できますか？

A：推奨されません。in vitroでの事前検証により、高効率なノックダウン配列を選別でき、in vivo実験の成功率向上とコスト削減につながります。

Q3：初期段階では何本のshRNA配列を設計すべきですか？

A：通常、3～5本の候補配列を設計し、in vitro評価により1～2本の有効配列を選定します。

Q4：初期段階の主なプロセスは何ですか？

A：主に以下のステップを含みます：
1）shRNA配列設計・スクリーニング
2）in vitroノックダウン検証
3）AAVベクター構築・最適化
4）小スケールウイルスパッケージングおよび力価測定
5）動物予備試験（パイロット試験）

Q5：ノックダウン効率はどのように評価しますか？

A：qPCRおよびWestern Blotにより評価し、

• mRNA発現が70%以上低下

• タンパク質発現が有意に減少
  した場合、有効と判断します。

Q6：AAV血清型の選択は必要ですか？

A：はい。血清型により組織指向性が異なるため、標的組織に応じて文献で検証された血清型を選択することが重要です。

Q7：AAVノックダウン効果はいつ確認できますか？

A：一般的に、

• 1週間：感染確認

• 2～3週間：ノックダウン効果発現

• 3～4週間：安定発現

Q8：初期段階での失敗要因は何ですか？

A：主な要因は以下の通りです：

• 無効なshRNA設計

• in vitro検証不足

• ウイルス力価不足

• プロモーター選択不適切

• 解析タイミングが早すぎる

Q9：初期検証後、すぐに本試験へ進めますか？

A：以下の条件を満たせば可能です：

• 有効なshRNA配列の取得

• 感染効率の確認

• 発現タイミングの把握

• 明らかな毒性がないこと

Q10：一括サービスの提供は可能ですか？

A：はい。shRNA設計からAAVパッケージング、in vitro / in vivo検証まで、一貫したソリューションをご提供可能です。