AAVベクターのパッケージングにおける一般的な問題

1. 収量が低い（Low Yield）

• 原因

  • トランスフェクション効率が低い（プラスミド比率が不適切、DNA品質の低下、細胞状態が不良）

  • 生産細胞（一般的にHEK293T）が対数増殖期にない

  • トランスフェクション試薬や条件が最適化されていない

• 対策

  • 細胞の健康状態を維持し、適切なコンフルエンシー（通常70〜80%）でトランスフェクションする

  • プラスミド比率を最適化す

  • 高品質でエンドトキシン除去済みのプラスミドを使用する

2. ウイルス純度が低い（Contamination / Impurities）

• 原因

  • パッケージング過程で宿主由来のタンパク質やDNAが混入

  • 精製方法が不十分、または操作が不適切

• 対策

  • CsCl密度勾配遠心やIodixanol勾配遠心による高純度化

  • 無菌操作を徹底し、細菌・真菌汚染を防ぐ

3. 力価（タイター）の不正確さ（Titer Issues）

• 原因

  • 測定方法（qPCR、ELISA、感染性アッセイ）の違いによるばらつき

  • 空カプシドが多く、ゲノムタイターと機能的タイターが一致しない

• 対策

  • ゲノムタイター（vg）と感染性タイター（TU）を両方測定する

  • 空カプシド率を減らす（生産条件や精製方法を最適化）

4. 空カプシドの割合が高い（High Empty Capsids）

• 原因

  • ゲノム封入効率が低い

  • プラスミド比率やRepCap発現が不適切

• 対策

  • Helper / RepCap / GOIプラスミドの比率を調整

  • CsCl密度勾配遠心などで空カプシドと完全カプシドを分離

5. 感染効率が低い（Low Transduction Efficiency）

• 原因

  • 標的細胞に対して血清型（Serotype）が適合していない

  • 細胞表面の受容体発現が不十分

  • 保存条件や凍結融解により力価が低下

• 対策

  • 適切なAAV血清型を選択する（例：AAV2、AAV8、AAV9は組織特異性が異なる）

  • 凍結融解を避け、分注保存する

  • MOIを上げる、または補助因子を併用して感染効率を改善

6. 生産細胞の状態が不良（Producer Cell Problems）

• 原因

  • HEK293T細胞の状態が悪い、または汚染

  • 継代数が多く、生産効率が低下

• 対策

  • 健康な細胞を維持し、低継代のストックから復帰させる

  • 培地や血清の品質を安定させる

AAVベクターのパッケージングにおける一般的な問題は、収量不足、純度低下、力価測定の不正確さ、空カプシドの増加、感染効率の低下などです。解決の鍵は、トランスフェクション条件の最適化、細胞の健康維持、適切な精製方法の採用、徹底した品質管理にあります。