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AAVウイルス感染後にGFP蛍光が弱い原因

Nov 26 , 2025
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AAV感染後に緑色蛍光が弱い場合、主にウイルス由来・細胞側要因・実験条件・観察/検出条件の4つの視点から考えることができます。

① ウイルス関連要因

  • ウイルスタイターが低い
    MOI不足により感染細胞が少なく、蛍光強度も低下。

  • ベクター設計・プロモーターの強度
    弱いプロモーター（例：細胞種によってはCMVが弱い）を使用している場合。
    IRES、イントロン、PolyA配列などの影響も受ける。

  • 遺伝子構築の影響
    EGFPが大きな目的遺伝子と融合している場合や、分解タグが付与されていると発現量が低下する。

  • 血清型と細胞適合性の不一致
    AAV血清型によって感染効率が異なる（例：AAV2は神経系で弱い場合など）。

② 細胞関連要因

  • 細胞自体がAAVに感染されにくい
    原代細胞・免疫系細胞などは感染効率が低いことがある。

  • 細胞の状態不良
    過密・過少コンフルエンス、老化、汚染はウイルス侵入を阻害。

  • 蛍光タンパク質の折り畳み効率低下
    低温・ストレス状態・酸化ストレス（ROS）増加でEGFPの成熟が阻害される。

③ 実験条件由来

  • 発現時間が不十分
    AAVは一般的に感染後48–72時間で蛍光が見え始める。観察が早すぎると弱く見える。

  • 感染促進剤を使用していない
    Polybreneなどの添加で感染効率が向上する場合がある。

  • ウイルス保存状態の問題
    凍結融解の繰り返し、長期保存により感染価が低下。

④ 観察・検出条件

  • 顕微鏡の励起波長や露光時間が適していない

  • 蛍光チャネルの設定ミス・光退色

  • 弱いシグナルにも関わらずゲインや露光が不足

改善のヒント

対策 効果
MOIを上げる / 感染回数を増やす 蛍光細胞数の増加
強力プロモーター（CAG/EF1α/CMV強化）に変更 発現量UP
細胞に適した血清型を選択 感染効率改善
72–120時間後に観察 EGFP成熟待ち
顕微鏡設定の最適化 弱い蛍光でも検出可能
感染助剤の併用・細胞状態の改善 蛍光強度向上

PackGeneについて

PackGene Biotech is a world-leading CRO and CDMO, excelling in AAV vectors, mRNA, plasmid DNA, and lentiviral vector solutions. Our comprehensive offerings span from vector design and construction to AAV, lentivirus, and mRNA services. With a sharp focus on early-stage drug discovery, preclinical development, and cell and gene therapy trials, we deliver cost-effective, dependable, and scalable production solutions. Leveraging our groundbreaking π-alpha 293 AAV high-yield platform, we amplify AAV production by up to 10-fold, yielding up to 1e+17vg per batch to meet diverse commercial and clinical project needs. Moreover, our tailored mRNA and LNP products and services cater to every stage of drug and vaccine development, from research to GMP production, providing a seamless, end-to-end solution.

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