1. ウイルス滴度が低い
考えられる原因：
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プラスミド比率の不適切（パッケージングプラスミド、エンベローププラスミド、目的遺伝子プラスミドの比率不均衡）
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細胞状態が悪い（過剰継代された293T細胞や活性が低い細胞）
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細胞密度が適切でない（過疎または過密）
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トランスフェクション試薬や方法の不適切（PEIやリポフェクション量の過不足）
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ウイルス収集や濃縮時の損失
対策：
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プラスミド比率を最適化（一般的に三プラスミド系では4:3:1：目的遺伝子:パッケージング:エンベロープ）
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対数増殖期で健康な293T細胞を使用
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適切な収穫タイミング（通常48–72時間）
2. 細胞死が多い
考えられる原因：
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トランスフェクション試薬やプラスミド量が多すぎる
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包装細胞の状態不良（過剰継代）
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培地成分の問題
対策：
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トランスフェクション条件を最適化
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健康な対数増殖期細胞を使用
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必要に応じて培地交換で毒性を軽減
3. 感染効率が低い
考えられる原因：
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ウイルス滴度が低い
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目的細胞が慢ウイルスに対して感受性が低い
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感染方法や時間が不適切（MOIが不足、阻害因子存在）
対策：
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適切なMOI（Multiplicity of Infection）を使用
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ポリブレンなどの陽イオンを加えて感染効率を向上
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感染時間を最適化
4. ウイルスの汚染（細菌・真菌・エンドトキシン）
考えられる原因：
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無菌操作が不十分
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試薬や培地が汚染されている
対策：
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厳密な無菌操作を徹底
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高品質の培地・試薬を使用
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ウイルス保存前にフィルター処理（0.45 μm）
5. ウイルスの安定性が低い
考えられる原因：
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保存温度が不適切（-80°Cが推奨）
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凍結融解を繰り返したことによる失活
対策：
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ウイルスを分注し、凍結融解を避ける
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低温で迅速に保存
6. 発現が遅い、蛍光が弱い
考えられる原因：
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プロモーター活性が低い
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目的遺伝子のサイズが大きい
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感染細胞タイプが適していない
対策：
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強いプロモーターを使用（例：EF1α、CMV）
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過大な遺伝子断片を避ける
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適切な細胞種を選択
PackGeneについて
PackGene Biotech is a world-leading CRO and CDMO, excelling in AAV vectors, mRNA, plasmid DNA, and lentiviral vector solutions. Our comprehensive offerings span from vector design and construction to AAV, lentivirus, and mRNA services. With a sharp focus on early-stage drug discovery, preclinical development, and cell and gene therapy trials, we deliver cost-effective, dependable, and scalable production solutions. Leveraging our groundbreaking π-alpha 293 AAV high-yield platform, we amplify AAV production by up to 10-fold, yielding up to 1e+17vg per batch to meet diverse commercial and clinical project needs. Moreover, our tailored mRNA and LNP products and services cater to every stage of drug and vaccine development, from research to GMP production, providing a seamless, end-to-end solution.
