AAV＋shRNA とは？

AAV（Adeno-associated virus：アデノ随伴ウイルス）は、低い免疫原性と高い安全性を特徴とする遺伝子デリバリー用ウイルスベクターです。
shRNA（short hairpin RNA）は、RNA干渉（RNAi）機構を利用して標的遺伝子のノックダウンを実現するツールです。

AAV ベクターに shRNA 発現カセットを組み込むことで、AAV-shRNA ベクターとなり、体内・体外における安定した遺伝子ノックダウンを可能にします。

AAV＋shRNA の作用メカニズム

1. AAV が細胞内へ shRNA 発現カセットを導入

2. 核内で shRNA が転写され、ヘアピン構造を形成

3. Dicer によって shRNA が siRNA にプロセシング

4. siRNA が RISC 複合体に導かれ、標的 mRNA を認識

5. mRNA が分解され、**遺伝子発現が抑制（Knockdown）**される

AAV-shRNA の主な応用分野

■ In vivo（生体内）

• マウス／ラットにおける組織特異的遺伝子ノックダウン

• 心血管・代謝・神経疾患モデルの構築

• CRISPR では困難な組織への安定発現

■ In vitro（細胞実験）

• 細胞株の安定ノックダウン

• 初代培養細胞や難トランスフェクト細胞への遺伝子抑制

• 長期培養実験での持続的な遺伝子発現制御

AAV-shRNA の利点

• ✔ 高い安全性（ゲノムへの挿入がない）

• ✔ 生体内での長期発現が可能

• ✔ 血清型＋プロモーターの組み合わせで組織特異性を付与

• ✔ トランスフェクションが難しい細胞にも有効

重要なポイント（注意事項）

1. shRNA 配列の設計

• オフターゲットを避けるため、特異性の確認が必須

• 対照用 scramble shRNA を準備することが推奨される

2. プロモーター選択

• U6 / H1：強力な Pol III プロモーター

• 組織依存で miR30 ベースの shRNA（miRNA-shRNA）を選択することも有効

3. AAV 血清型の選択

例：

• AAV9：心臓・中枢神経系

• AAV8：肝臓

• AAV-PHP.eB：中枢神経系（マウス系統依存）

4. ノックダウンが現れる時間

• In vitro：3〜5 日

• In vivo：2〜3 週間で安定発現