力価は高いのに感染効率が低いのはなぜ？

AAVで「力価（titer）は高いのに、感染効率（＝実際の発現や機能）が低い」場合、かなりよくある現象です。
原因は「数は多いが“使えない粒子”が多い」ことに集約されます。以下を系統的に整理します。

① 力価測定法と“実効粒子”の乖離

最も多い原因です。

● qPCR / ddPCR力価

• 中身の入っていない空カプシド

• 部分的に壊れたゲノム

• 発現不能な配列

👉 「物理力価は高いが、感染可能力価（infectious titer）が低い」

対策

• SDS-PAGE or EMで空カプシド比率を確認

• TCID50 / functional titer（蛍光発現、Luc活性）を併用

② 空カプシド・欠損粒子が多い

• パッケージング条件が最適でない

• Rep/Cap比、helper活性不足

• 過剰発現ベクター（毒性遺伝子）

👉 細胞に入っても何も起きない

典型サイン

• qPCR力価高い

• in vitro発現弱い

• in vivoでも反応がない

③ 血清型と標的細胞が合っていない

受容体発現の問題

• 細胞がそのAAV血清型の受容体を持たない

• in vitroでは特に顕著

例：

• AAV8 → HEK293では感染効率低い

• AAV9 → 一部培養細胞ではほぼ入らない

対策

• 血清型再検討（AAV2, DJ, DJ/8など）

• PolybreneはAAVではほぼ無効

• in vitro特化型血清型を使う

④ プロモーターが沈黙している

「感染はしているが、発現しない」ケース

よくある例

• CMV：特定細胞でサイレンシング

• 組織特異的プロモーターをin vitroで使用

• エピジェネティック抑制

👉 感染効率が低いように“見える”

対策

• CAG / EF1α / CBhで比較

• mRNA量（RT-qPCR）で侵入確認

⑤ ゲノム設計の問題

• ITR損傷

• 過剰サイズ（>4.7 kb）

• 強毒性遺伝子（細胞がすぐ死ぬ）

👉 細胞内で安定に存在できない

チェック

• プラスミド制限酵素解析

• シーケンス

• サイズ確認

⑥ 純化・保存ダメージ

• CsCl / Iodixanol後の取り扱い不良

• 凍結融解の繰り返し

• 不適切なバッファ

👉 見かけの力価は維持、感染能だけ喪失

対策

• −80℃保存、凍結融解1回以内

• Pluronic F68添加

• 新旧ロット比較

⑦ in vivo特有の要因（動物実験）

• 中和抗体

• 投与ルート不適

• 投与量不足／過剰