AAV9 rep/cap プラスミドとは

AAV9 rep/cap プラスミドは、AAV9 血清型の複製機能およびカプシド形成に必要な遺伝子を提供する包装補助プラスミドであり、AAV ベクター製造において不可欠な構成要素です。

1. AAV9 rep/cap プラスミドの構成

AAV9 rep/cap プラスミドには以下の遺伝子が含まれます：

rep 遺伝子

• rep78 / rep68 / rep52 / rep40
• AAV ゲノムの複製およびパッケージング制御を担う

cap 遺伝子（AAV9 血清型）

• VP1 / VP2 / VP3
• ウイルスの血清型、生体内分布、組織指向性を決定

※ 本プラスミドには ITR 配列は含まれておらず、ウイルス粒子としてパッケージングされることはありません。

2. AAV パッケージングにおける役割

一般的に用いられる 三プラスミドシステムは以下の通りです：

トランスファープラスミド（ITR-GOI）

• ITR 配列および目的遺伝子を含む

AAV9 rep/cap プラスミド ✅

• 複製およびカプシド形成を担う

ヘルパープラスミド

• アデノウイルス由来の補助遺伝子（E2A / E4 / VA RNA）を供給

これらを HEK293 / 293T 細胞に共トランスフェクションすることで、AAV9 ウイルスベクターが産生されます。

3. AAV9 血清型の特長

AAV9 は研究用途から前臨床研究まで幅広く使用されています：

🧠 血液脳関門（BBB）を通過可能
（特に新生仔マウスや静脈投与条件下）

❤️ 心臓、🫁 肺、🧠 中枢神経系に対して高い導入効率

🧬 主な応用分野

• 神経系研究
• 心血管疾患
• 筋疾患
• 遺伝子治療研究

4. プラスミドの一般的な仕様

※ メーカーにより多少の差異があります。

プラスミドサイズ：約 7.5～8.5 kb

プロモーター：

• rep / cap 遺伝子は通常、AAV 由来の制御配列により発現制御

抗生物質耐性：Ampicillin（最も一般的）

グレード：

• 研究用グレード（Research Grade）
• 臨床用途には GMP 準拠の設計・製造・トレーサビリティが必要

5. 使用時の注意点

1. rep/cap と血清型は一対一対応

   • AAV9 ベクターには AAV9 rep/cap プラスミドを使用する必要があります

2. プラスミド品質は力価に直結

   • エンドトキシン濃度が高いと細胞状態が悪化し、ウイルス力価が低下

3. cap 発現量は空カプシド率に影響

   • cap 過剰発現は空カプシド増加の原因となる

4. 研究用と臨床用は別物

   • IND／臨床試験では、rep/cap の由来、配列確認、品質試験の要件が厳格

6. よくある質問

Q：AAV9 rep/cap は他の ITR と組み合わせて使用できますか？
→ はい。rep は主に AAV2 ITR を認識するため、研究用途では一般的に用いられています。

Q：AAV9 の力価が低い原因は rep/cap にありますか？
→ 多くの場合、以下の要因が関与します：

• プラスミドの品質

• rep/cap の投入比率

• cap 発現バランス