腺関連ウイルス（AAV）パッケージングに関するよくある質問（FAQ）

Q1. AAVパッケージングがうまくいかない主な原因は何ですか？

A. 主な原因として、以下が挙げられます。

• 挿入遺伝子サイズが大きすぎる（一般にITR間で約4.7 kb以内が推奨）
• 強毒性／細胞毒性の高い遺伝子による宿主細胞への負担
• プロモーターやエンハンサーの不適切な選択
• rep/capプラスミドやヘルパープラスミドの品質不良
• トランスフェクション条件（DNA量、比率、試薬、細胞状態）の最適化不足

Q2. AAVの力価（タイター）が低いのはなぜですか？

A. 力価低下の要因として、以下が考えられます。

• トランスフェクション効率が低い
• ウイルス回収時の操作ロス（回収タイミング、凍結融解条件など）
• 精製工程でのロスや不適切な精製方法
• 空殻ウイルス（empty capsid）の割合が高い
• 保存条件（温度、凍結融解回数）が不適切

Q3. 空殻ウイルスの割合が高くなる原因は？

A. 主な原因は以下の通りです。

• ゲノムサイズが小さすぎる、またはパッケージング効率が低い配列設計
• rep/capとベクタープラスミドの比率不適切
• パッケージング細胞の状態不良
• 精製方法（密度勾配超遠心など）の最適化不足

Q4. AAV感染後に遺伝子発現が見られない／低いのはなぜですか？

A. 以下の点を確認してください。

• 標的細胞／組織に適した血清型（セロタイプ）を使用しているか
• プロモーターが標的細胞で活性を持つか
• MOI（感染多重度）が十分か
• 発現確認までの培養・観察期間が適切か
• レポーター遺伝子やタグ配列の設計に問題がないか

Q5. in vivo実験にAAVがよく使われる理由は何ですか？

A. AAVは以下の利点を持つため、in vivo実験に適しています。

• 免疫原性が比較的低い
• 長期発現が可能
• 非分裂細胞（神経細胞など）にも高効率で感染可能
• 多様な血清型により組織指向性を選択できる

Q6. AAVの保存条件は？

A. 一般的には以下が推奨されます。

• 短期保存：4°C（数日〜1週間程度）
• 長期保存：-80°C
• 凍結融解は極力避け、アリコート分注を推奨

Q7. 科研用途のAAVをそのまま臨床研究に使用できますか？

A. 通常、使用できません。臨床用途ではGMP準拠製造、厳格な品質管理（無菌、エンドトキシン、完全配列確認など）が必須です。科研グレードAAVは研究目的に限定して使用してください。

Q8. AAVパッケージングを外注する際の注意点は？

A. 以下の点を確認することをおすすめします。

• 対応可能な血清型・プロモーターの種類
• 実績と品質管理体制
• 力価測定方法（qPCR、ddPCR、ELISAなど）
• 納期、技術サポートの有無