対象：接着細胞／浮遊細胞／初代細胞／難感染細胞
基本方針：まず本当に「感染していない」のかを確認し、MOI・ウイルス品質・細胞状態・感染条件・ベクター設計の5つの観点から順に見直す
1. 本当に「感染効率が低い」のか？
条件最適化の前に、評価方法を明確にすることが重要です。
主な評価指標
- 蛍光発現率（蛍光顕微鏡／フローサイトメトリー）
- qPCR（ゲノムへの組込みコピー数）
- Western blot／機能解析
⚠️ 注意：
- 弱いプロモーターや発現の遅い遺伝子では、48時間でシグナルが見えなくても感染失敗とは限らない
- 「感染しているが発現していない」ケースも多い
2. よくある原因と対策
① MOI が低すぎる
| 状態 | 対策 |
| 陽性細胞が少ない | MOI グラデーション（5 / 10 / 20 / 50）を設定 |
| 難感染細胞 | MOI 20 以上から検討 |
② ウイルス力価の過大評価・失活
原因
- p24 や RNA copy を力価として使用
- 凍結融解の繰り返し
- 保存条件不良
対策
- 機能力価（TU/mL） を基準にする
- −80℃で分注保存（1回使い切り）
- 解凍後 1–2 時間以内に使用
③ 細胞状態が不良
| 状態 | 影響 |
| 過密／希薄 | 感染効率低下 |
| 復活直後 | 感受性低下 |
| マイコプラズマ汚染 | 著しい効率低下 |
推奨条件
- 接着細胞：感染時 30–50% コンフルエンシー
- 感染前に最低 1 回の安定継代
④ 感染促進剤の条件不適合
| 項目 | 推奨 |
| Polybrene | 4–8 μg/mL |
| 毒性が強い場合 | Protamine sulfate（5–10 μg/mL） |
⑤ 感染時間が短い／早すぎる培地交換
- 感染時間：6–12 時間（細胞によっては 24 時間）
- 2 回感染（Day 0 + Day 1） も有効
⑥ プロモーターの不適合
| プロモーター | 特徴 |
| CMV | 一般細胞で高発現、初代細胞ではサイレンシングあり |
| EF1α | 初代細胞・幹細胞で安定 |
| PGK | 発現弱めだが安定 |
| SFFV | 高発現、細胞毒性に注意 |
⑦ 目的遺伝子の細胞毒性
現象
- 初期は発現あり、後に消失
- 細胞死・増殖停止
対策
- 弱いプロモーターの使用
- Tet-on 誘導系
- 低 MOI + 薬剤選択
⑧ 細胞自体が難感染
例
- 初代 T/B 細胞
- マクロファージ
- 幹細胞
対策
- MOI 増加
- スピン感染（800–1200 g、30–90 分）
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