AAV ウイルス包装における三プラスミドシステム（FAQ）

Q1：AAV ウイルス包装にはどのプラスミドが使用されますか？

AAV ウイルスは、通常三プラスミド共トランスフェクション法により製造されます。使用されるプラスミドは以下の 3 種類です。

1. AAV 発現プラスミド（Transfer / Expression Plasmid）

2. AAV 包装プラスミド（Rep-Cap Plasmid）

3. ヘルパープラスミド（Helper Plasmid）

Q2：AAV 発現プラスミドの役割は何ですか？

AAV 発現プラスミドは、目的遺伝子を搭載する中核プラスミドです。
主な特徴：

• 両端に ITR（Inverted Terminal Repeat）配列を含む

• ITR 間に完全な遺伝子発現カセット（プロモーター、目的遺伝子、タグ、polyA など）を配置

📌 最終的に AAV ウイルス粒子へ実際に封入されるのは、このプラスミド由来の配列のみです。

Q3：Rep-Cap プラスミドの役割は何ですか？

Rep-Cap プラスミドは、AAV の複製およびカプシド形成に必要な遺伝子を提供します。

• Rep 遺伝子：AAV ゲノムの複製を制御

• Cap 遺伝子：AAV の血清型（AAV2、AAV8、AAV9 など）を決定

📌 血清型の変更は、Rep-Cap プラスミドを変更することで行われます。

Q4：ヘルパープラスミドは必須ですか？

はい、必須です。
ヘルパープラスミドは、腺ウイルス由来の補助遺伝子（E2A、E4、VA RNA など）を供給し、

• AAV 複製の活性化

• ウイルス粒子の組み立て
  を促進します。

📌 ヘルパープラスミド自体は、AAV ウイルス粒子に封入されません。

Q5：なぜ三つのプラスミドが必要なのですか？

AAV は複製欠損型ウイルスであり、単独では複製・組み立てができません。
三プラスミドシステムを用いることで：

• 製造の安全性向上

• 野生型 AAV 生成リスクの低減

• 安定した高効率包装
  が可能になります。

Q6：三つのプラスミドはすべてウイルスに入りますか？

いいえ。

• ウイルス粒子に封入される：AAV 発現プラスミド（ITR 間配列）

•  封入されない：Rep-Cap プラスミド、ヘルパープラスミド