ウイルスベクター作製 よくある質問（FAQ）

本ページでは、研究者の皆様からよく寄せられる
AAV／レンチウイルスベクター作製に関する質問と解決策をまとめています。

Q1：ウイルス力価が低い原因は何ですか？

主な原因

• プラスミドDNAの純度不足（エンドトキシン高値）

• トランスフェクション効率の低下

• 遺伝子サイズがパッケージング容量を超過

• 細胞状態不良（密度・生存率）

解決策

• 高純度・低エンドトキシンのプラスミドを使用

• トランスフェクション条件の最適化

• 遺伝子サイズの管理

  • AAV：4.7 kb 以下（ITR 含む）

  • レンチウイルス：8–9 kb 以下

• 対数増殖期・生存率90%以上の細胞を使用

Q2：感染後に発現しない、または発現が低いのはなぜですか？

主な原因

• プロモーターが標的細胞に適していない

• AAV 血清型の選択ミス

• MOI が低すぎる

• 遺伝子自体の発現制限または毒性

解決策

• 細胞種に適したプロモーターを選択（CMV、EF1α、CAG など）

• 組織・動物種に応じた AAV 血清型を選択

• MOI の段階的検討

• GFP や FLAG などのタグによる確認

Q3：感染後に細胞死が多く発生します

主な原因

• ウイルス量が過剰

• 遺伝子毒性

• 感染条件が過剰

解決策

• MOI を下げる、分割感染

• 誘導発現系（Tet-On）の使用

• 感染時間の短縮

• 感受性の高い細胞にはレンチウイルスを推奨

Q4：AAV の空カプシド比率が高い場合、問題になりますか？

説明

空カプシドは遺伝子を含まないため、有効感染効率を低下させます。

対策

• 三種プラスミド比率の最適化

• ITR 配列の完全性確認

• 密度勾配遠心やクロマトグラフィーによる精製

• 成熟した製造プロセスを持つサービスの利用

Q5：ウイルスの保存方法を教えてください

• -80℃ で長期保存

• 小分け保存し、凍結融解を繰り返さない

• 使用時は 37℃ で迅速解凍後、直ちに氷上保持

Q6：ウイルス力価測定値が異なるのはなぜですか？

理由

• 測定方法の違い

  • AAV：vg/mL（qPCR）

  • レンチウイルス：TU/mL、IFU/mL

推奨

• 同一プロジェクト内で測定方法を統一

• COA（解析報告書）の確認

Q7：ウイルス実験の成功率を高めるには？

• 適切なベクター設計

• 安定した製造プロセス

• 高品質ウイルスの使用