FAQ｜AAVは細胞実験に使用できますか？

1. AAVは体外細胞実験に使用できますか？

はい、使用できます。

AAVは、体外細胞トランスダクション（感染）の有効なツールの一つであり、以下の用途で広く使用されています：

• 目的遺伝子の過剰発現やノックダウン（shRNAによる）

• ゲノム編集（sgRNAの発現）

• レポーター遺伝子アッセイ

• 長期的な遺伝子機能の研究

2. どのような細胞がAAV感染に適していますか？

AAVは、特に分裂が遅い、または分裂しない細胞への感染に優れています。例：

• 神経細胞、グリア細胞、神経幹細胞

• 心筋細胞、骨格筋細胞

• 肝細胞、一部の初代培養細胞

• 分化した細胞や特定の幹細胞

HEK293やHeLaなどの増殖が速い細胞系では、AAVゲノムが希釈されやすく、長期的な発現効率が低下する可能性があります。その場合は、レンチウイルスやプラスミドトランスフェクションがより適している場合があります。

3. 細胞実験でAAVを使用する主な利点は何ですか？

• 安全性が高い： 野生型AAVは病原性がなく、組換えAAVは一般に宿主ゲノムに組み込まれないため（エピソームとして存在）、発がんリスクが極めて低い。

• 細胞毒性が低い： 細胞の状態への影響が少なく、デリケートな初代培養細胞や神経細胞に特に適している。

• 発現が長期的で安定： 非分裂細胞では数ヶ月からそれ以上にわたる安定した発現が可能。

• 血清型の多様性： 異なる血清型（AAV1, 2, 5, 6, 8, 9, DJ, PHP.eBなど）は細胞親和性が異なり、最適な血清型を選択することで特定の細胞への感染効率を向上させることができる。

4. 実験計画と操作において特に注意すべき点は何ですか？

• 血清型の選択： 細胞の種類が血清型選択の第一の基準です。事前に予備実験を行い、最適な血清型を決定することを強く推奨します。

• MOI（感染多重度）が高い： 体外実験では通常、高いウイルス量が必要で、一般的なMOIの範囲は 10⁴ – 10⁶ vg/細胞 です。細胞の種類に応じて最適化が必要です。

• 発現開始が遅い： 感染から目的のタンパク質が十分に発現するまでには、通常 3〜7日 かかります。実験計画には十分な時間的余裕を持たせてください。

• パッケージング容量に制限がある： AAVベクターの有効なパッケージング上限は約 4.7 kb です（プロモーター、目的遺伝子、polyAなど全ての要素を含む）。ベクター設計時には長さを厳密に管理する必要があります。

5. どのような場合に、AAVを細胞実験に使用することはお勧めしませんか？

以下のような場合には、他のデリバリー方法を検討してください：

• 迅速な検証（24〜72時間）が必要な場合： プラスミドトランスフェクションの方が迅速かつ経済的です。

• 細胞の分裂が非常に速い場合： ゲノムに組み込まれるレンチウイルスの特性が、このような細胞により適しています。

• 目的遺伝子のフラグメントが大きすぎる（>4.7kb）、または複数の遺伝子を共発現させる必要がある場合： レンチウイルスの使用や、複数のベクターを共感染させる戦略を検討してください。

• 誘導型または一時的な高発現が必要な場合： アデノウイルスやエレクトロポレーションなどの他のシステムが適している可能性があります。