AAVウイルスの発現が弱い／発現しない原因は何ですか？

AAV発現効率は、ベクター設計、血清型選択、ウイルス品質、投与方法、検出時期など複数の要因に影響を受けます。発現が弱い、または確認できない場合は、以下の項目をご確認ください。

1. プロモーターの選択は適切ですか？

プロモーター活性は細胞種や組織によって大きく異なります。

• CMVプロモーターは一部の初代細胞や神経組織でサイレンシングが起こる場合があります

• EF1αプロモーターは安定発現が期待できますが、発現強度は中程度です

• CAGやhSynは神経系で高い発現効率を示します

推奨事項： 目的組織に適したプロモーターを選択し、必要に応じてin vitroで事前評価を実施してください。

2. 血清型は対象組織・動物種に適していますか？

血清型ごとに組織指向性が異なります。

• AAV2：局所投与に適しています

• AAV9：血液脳関門（BBB）通過能を有します

• AAV-PHP.eB：マウス脳で高効率ですが、霊長類では効果が限定的です

推奨事項： 動物種および投与経路に応じて適切な血清型をご選択ください。

3. ウイルス力価は十分ですか？

• in vivo実験では通常 10¹¹～10¹³ vg/匹（投与経路により異なる）

• 細胞感染では十分なMOI設定が必要です

凍結融解の繰り返しは力価低下の原因となります。

4. ベクター構造に問題はありませんか？

以下をご確認ください：

• 挿入配列の総長が 4.7 kb の包装上限を超えていないか

• ITRが完全であるか

• polyAシグナルが存在するか

• 目的遺伝子に細胞毒性がないか

プラスミドのシーケンス確認を推奨します。

5. 投与操作は適切でしたか？

• 正確な部位へ注入されていますか

• 静脈内投与が確実に行われていますか

• 注入速度は適切ですか

組織中のウイルスゲノムをPCRで確認することも有効です。

6. 検出時期は適切ですか？

AAV発現には一定期間が必要です。

• 細胞実験：3～5日

• マウス体内：通常2～4週間でピーク発現

検出時期が早すぎると発現低下と誤認される場合があります。

7. 免疫応答の影響はありませんか？

• 既存の中和抗体

• 目的タンパク質の高い免疫原性

• 強力なプロモーターによる免疫誘導

技術サポートのためにご提供いただきたい情報

• 使用血清型

• 動物種および投与方法

• 投与量（vg/匹 または MOI）

• 検出時期

• 検出方法（蛍光、qPCR、WB など）