AAVの品質管理（QC）で一般的に行われる項目

AAV（アデノ随伴ウイルス）の研究開発および製造において、品質管理（Quality Control, QC）は極めて重要です。
実験における「発現不良」「感染効率の低下」「バッチ間差異」などの多くは、QC項目の不十分さに起因する場合があります。

AAVのQCは主に以下のカテゴリに分類されます。

1. AAVの同定（Identity）

1) ゲノム構造確認

PCR、qPCR、Sangerシーケンス、NGSなどを用いて以下を確認します：

• ITR配列の完全性
• 目的遺伝子の正確性
• プロモーターおよび発現カセットの構造
• 再構成・欠失の有無

2) セロタイプ確認（Serotype Identification）

AAV2、AAV5、AAV9、AAV-PHP.eBなどのセロタイプ差異は組織嗜性に大きく影響します。

主な評価方法：

• カプシド特異的抗体検出
• PCR / シーケンス解析
• カプシドタンパク質解析

誤ったセロタイプは感染効率低下や標的組織の変化を引き起こします。

2. タイター測定（Titer Assay）

1) vg/mL（Vector Genome）

qPCRまたはddPCRにより測定されるゲノムコピー数。

• qPCR：迅速・高スループットだが標準曲線依存
• ddPCR：絶対定量が可能で再現性が高い

2) TU/mL（Transducing Unit）

感染能を有する機能的ウイルス粒子量を評価します。

• 細胞感染アッセイ
• フローサイトメトリー
• 蛍光発現解析

3. 純度評価（Purity）

1) SDS-PAGE

カプシドタンパク質（VP1/VP2/VP3）の確認：

典型比率：
VP1 : VP2 : VP3 ≈ 1 : 1 : 10

2) 銀染色（Silver Staining）

微量不純物および宿主タンパク質残留の検出。

3) HCP（Host Cell Protein）

宿主細胞由来タンパク質の残留評価。

4) 残留DNA

• 宿主細胞DNA
• プラスミドDNA
• helper DNA

qPCRまたは蛍光法（PicoGreenなど）で測定。

4. フル/エンプティ比（Full/Empty Ratio）

AAV粒子には以下が存在：

• ゲノム封入粒子（Full capsid）
• 空カプシド（Empty capsid）
• 部分封入粒子

評価方法：

• 超遠心（AUC / CsCl）
• TEM（透過電子顕微鏡）
• SEC-MALS / HPLC

5. 生物学的活性（Potency Assay）

単なるvg/mLではなく、実際の機能性を評価します。

• 細胞感染による発現評価（GFPなど）
• Western blot / IF解析
• CRISPR編集効率
• shRNAノックダウン効率

6. 安全性試験（Safety）

1) エンドトキシン

LAL法により測定。高値は炎症反応を誘導。

2) 無菌試験

細菌・真菌汚染の検出。

3) マイコプラズマ検査

細胞機能および発現効率に影響。

7. 安定性試験（Stability）

• 4℃短期保存安定性
• −80℃長期保存安定性
• 凍結融解耐性
• 輸送条件下での安定性

※vg/mLが維持されても感染能が低下する場合あり。

まとめ

AAVのQCは以下の項目から構成されます：

• 同定（構造・セロタイプ）
• タイター測定（vg / TU）
• 純度評価（SDS-PAGE / HCP / DNA残留）
• フル/エンプティ比
• 生物学的活性
• 安全性
• 安定性

高いvg/mL値だけでは品質は保証されず、感染活性・純度・構造均一性が重要な評価指標となります。