AAV(アデノ随伴ウイルス)を用いたノックダウンベクターは、一般的にノックダウン手法、ベクター構造、標的遺伝子、血清型、レポーター遺伝子などに基づいて命名されます。統一された命名規則は、実験設計、ウイルス発注、データ管理、および論文作成において重要です。
1. 一般的な命名形式
AAVノックダウンウイルスは、通常以下の形式で表記されます。
AAV-血清型-プロモーター-ノックダウン要素-標的遺伝子-レポーター遺伝子
例:
AAV9-U6-shGeneX-CMV-EGFP
この名称は以下を意味します。
- AAV9血清型
- U6プロモーターによるshRNA発現
- GeneXを標的とするshRNA
- CMVプロモーターによるEGFP発現
このような命名方法はベクター構成を明確に示すことができ、学術論文やウイルス作製サービスで広く使用されています。
2. shRNAノックダウンウイルスの一般的な表記
shRNAを用いて遺伝子発現を抑制する場合、以下のような表記がよく使用されます。
AAV-shGeneX
AAV-shRNA-GeneX
AAV9-U6-shGeneX
AAV9-U6-shGeneX-CMV-GFP
AAV9-U6-shGeneX-CMV-EGFP
ここで、
- shGeneX:GeneXを標的とするshRNA
- U6またはH1:shRNA発現によく用いられるプロモーター
- GFP、EGFP、mCherry:感染効率や発現確認のためのレポーター
代表的なベクター構造は以下の通りです。
ITR
├─ U6-shGeneX
├─ CMV-EGFP
ITR
3. miRNA/shRNAmirノックダウンウイルスの命名方法
miR30などのmiRNA骨格を利用したRNA干渉システムでは、以下のような表記が一般的です。
AAV-miR30-shGeneX
AAV-CAG-miR30-shGeneX-EGFP
AAV-hSyn-miR30-shGeneX
AAV9-CAG-miR30-shGeneX-GFP
AAV9-hSyn-miR30-shGeneX-EGFP
このタイプのベクターでは、shRNAがmiRNA骨格内に組み込まれ、CAG、CMV、EF1α、hSynなどのPol IIプロモーターによって発現します。
従来のU6-shRNAシステムと比較して、組織特異的な発現制御や安定した発現が期待できます。
4. CRISPRiによる遺伝子発現抑制ベクター
CRISPR interference(CRISPRi)を利用する場合、一般的な表記は以下の通りです。
AAV-sgGeneX-dCas9-KRAB
AAV9-U6-sgGeneX-CMV-dCas9-KRAB
AAV9-U6-sgGeneX-EF1α-dCas9-KRAB
ここで、
- sgGeneX:GeneXプロモーター領域を標的とするsgRNA
- dCas9-KRAB:転写抑制ドメインを融合したCRISPRiシステム
ただし、AAVの搭載容量は通常約4.7 kbであるため、dCas9-KRABおよびsgRNA発現カセットを単一AAVに搭載することが難しい場合があります。
そのため実際には、以下のようなデュアルAAVシステムがよく利用されます。
AAV1:U6-sgGeneX
AAV2:dCas9-KRAB
したがって、「AAV-sgGeneX-dCas9-KRAB」という表記はシステム全体を示すものであり、必ずしも単一ベクター構造を意味するものではありません。
5. コントロールウイルスの表記
陰性対照ウイルスには一般的に以下の名称が使用されます。
AAV-shCtrl
AAV-shNC
AAV-shScramble
AAV-scrambled shRNA
AAV-U6-shNC-CMV-EGFP
ここで、
- shCtrl:Control shRNA
- shNC:Negative Control shRNA
- Scramble:ランダム配列shRNA
実験群は以下のように表記されます。
AAV-shGeneX
AAV-U6-shGeneX-CMV-EGFP
AAV-miR30-shGeneX
6. 論文および実験計画書での推奨表記
初出時には完全な名称を記載することが推奨されます。
本研究では、GeneXを標的とするAAV9ノックダウンウイルス(AAV9-U6-shGeneX-CMV-EGFP)を構築した。U6プロモーターによりshRNAを発現させ、CMVプロモーターによりEGFPを発現させることで、マウス海馬におけるGeneX発現の抑制を目的とした。
以降は以下のように簡略表記できます。
AAV-shGeneX群
AAV-shNC群
GeneX knockdown群
Control群
7. ウイルス作製サービスにおける推奨命名形式
ウイルス発注書、品質報告書、および製品資料では、以下の形式を推奨します。
AAV9-U6-shGeneX-CMV-EGFP
AAV9-U6-shNC-CMV-EGFP
AAV9-hSyn-shGeneX-EGFP
AAV9-CAG-miR30-shGeneX-EGFP
標準的なAAVノックダウンウイルス名には、以下の情報を含めることが推奨されます。
- 血清型(AAV2、AAV5、AAV8、AAV9など)
- プロモーター(U6、H1、CMV、CAG、EF1α、hSynなど)
- ノックダウン要素(shRNA、miR30-shRNA、sgRNAなど)
- 標的遺伝子名
- レポーター遺伝子(EGFP、GFP、mCherryなど)
そのため、多くの研究用途では以下の形式が推奨されます。
AAV9-U6-shGeneX-CMV-EGFP
この命名方式により、血清型、発現カセット構成、ノックダウン戦略、およびレポーター情報を明確に示すことができ、実験管理や論文発表において高い利便性を提供します。
PackGeneについて
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